Алкална протеаза
  • Air ProАлкална протеаза

Алкална протеаза

Алкалната протеаза трябва да се съхранява на сухо, хладно и добре проветриво място далеч от слънцето, топлината.

Изпратете запитване

Описание на продукта


Приложение и принцип

Тази алкална протеаза се използва за определяне на протеазна активност, изразена като PC единици, на препарати, получени от Bacillus subtilis var. и Bacillus licheniformis var. Изследването се основава на 30-минутна протеолитична хидролиза на казеин при 37 ° и рН 7,0. Нехидролизираният казеин се отстранява чрез филтриране и разтвореният казеин се определя спектрофотометрично.


Реактиви и разтвори на алкална протеаза
Казеин Използвайте казеин клас Hammarsten (United States Biochemical Corp., Каталожен номер 12840 или еквивалентен).
Трис буфер (рН 7.0) Разтваря се 12.1 g ензимен клас (или еквивалентен) трис (хидроксиметил) аминометан в 800 ml вода и се титрува с 1 N солна киселина до рН 7.0. Прехвърля се в мерителна колба от 1000 ml, разрежда се до вода с вода и се разбърква.
TCA разтвор Разтворете 18 g трихлороцетна киселина и 19 g натриев ацетат трихидрат в 800 ml вода в 1000-милилитрова мерителна колба, добавете 20 ml ледена оцетна киселина, разредете до обема с вода и разбъркайте.
Разтвор на субстрата Разтворете 6,05 g ензимен трис (хидроксиметил) аминометан в 500 ml вода, добавете 8 ml 1 N солна киселина и разбъркайте. Разтваря се 7 g казеин в този разтвор и се загрява за 30 минути във вряща водна баня, като се разбърква от време на време.
Охлажда се до стайна температура и се регулира до рН 7,0 с 0,2 N солна киселина, като киселината се добавя бавно, при енергично разбъркване, за да се предотврати утаяването на казеина. Прехвърлете сместа в мерителна колба от 1000 ml, разредете до обем с вода и разбъркайте.

Приготвяне на пробата Използвайки Tris Buffer, пригответе разтвор от пробния ензимен препарат, така че 2 mL от крайното разреждане да съдържат между 10 и 44 бактериални протеазни единици.


Процедура на алкална протеаза
Пипетирайте 10,0 ml от субстратния разтвор във всяка от поредица от 25- × 150 mm епруветки, позволявайки една епруветка за всеки ензимен тест, една епруветка за всяка ензимна заготовка и една епруветка за субстратна заготовка. Уравнете епруветките за 15 минути във водна баня, поддържана при 37 ° ± 0,1 °.
Започвайки хронометъра в нулево време, бързо вкарайте 2,0 ml от пробата в равновесния субстрат. Смесете и сменете тръбите на водната баня. Добавете 2 ml Tris буфер (вместо подготовката на пробата) към заготовката на субстрата. След точно 30 минути добавете 10 ml TCA разтвор към всяка ензимна инкубация и към празната повърхност, за да спрете реакцията. Загрейте епруветките във водната баня за допълнителни 30 минути, за да може протеинът да се коагулира напълно.
В края на втория период на нагряване, разклатете енергично всяка епруветка и филтрирайте през 11-сантиметрова Whatman No. 42 или еквивалентна филтърна хартия, изхвърляйки първите 3 ml филтрат.
[Забележка: Филтратът трябва да е напълно бистър.]
Определете абсорбцията на всеки пробен филтрат в 1-сантиметрова клетка, при 275 nm, с подходящ спектрофотометър, като използвате филтрата от заготовката на субстрата, за да настроите уреда на нула. Коригирайте всяко отчитане, като извадите съответното отчитане на ензима и запишете така получената стойност като AU.

Прехвърляне на 100,0 mg L-тирозин, хроматографски или еквивалентен (Aldrich Chemical Co.), предварително изсушен до постоянно тегло, в мерителна колба от 1000 ml. Разтваря се в 60 ml 0,1 N солна киселина. Когато се разтвори напълно, разтворът се разрежда с вода и се разбърква добре. Този разтвор съдържа 100 µg тирозин в 1,0 ml. Пригответе още три разреждания от този изходен разтвор, за да съдържат 75,0, 50,0 и 25,0 µg тирозин на mL. Определете абсорбцията на четирите разтвора при 275 nm в 1-сантиметрова клетка на подходящ спектрофотометър спрямо 0,006 N солна киселина. Изгответе график на абсорбция спрямо концентрация на тирозин.


Изчисляване на алкалната протеаза
Една бактериална протеазна единица (PC) се дефинира като това количество ензим, което произвежда еквивалент на 1,5 µg / ml L-тирозин на минута при условията на анализа.
От стандартната крива и чрез интерполация определете абсорбцията на разтвор с концентрация на тирозин 60 µg / mL. Трябва да се получи цифра, близка до 0,0115. Разделете интерполираната стойност на 40, за да получите абсорбцията, еквивалентна на тази на разтвор с концентрация на тирозин 1,5 µg / mL, и запишете получената стойност като AS.
Изчислява се активността на пробния ензимен препарат по уравнението

PC / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

в която 22 е крайният обем, в mL, на реакционната смес; 30 е времето, в мин, на реакцията; и W е теглото, в g, на оригиналната взета проба.

Опаковане и съхранение на алкална протеаза

Опаковъчна торбичка за твърда храна, 25 кг / цев.


Алкалната протеаза трябва да се съхранява на сухо, хладно и добре проветриво място далеч от слънцето, топлината.

Плащане:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC и др.

Горещи маркери: Алкална протеаза, Производители, Доставчици, Търговия на едро, Купуване, Фабрика, Персонализирани, На склад, Насипни, Безплатни мостри, Марки, Китай, Произведени в Китай, Евтини, Отстъпки, Ниска цена, Купете отстъпки, Цена, Ценова листа, Предложение, GMP, Качество, Последни продажби, Две години Срок на годност

Свързана категория

Изпратете запитване

Моля, прочетете формата си по-долу. Ще ви отговорим в рамките на 24 часа.