Киселинна протеаза
  • Air ProКиселинна протеаза

Киселинна протеаза

Тази киселинна протеаза се използва за определяне на протеолитичната активност, изразена като хемоглобинови единици на основата на тирозин (HUT).

Изпратете запитване    PDF DownLoad

Описание на продукта


Приложение и принцип

Тази киселинна протеаза се използва за определяне на протеолитичната активност, изразена като хемоглобинови единици на основата на тирозин (HUT), на препарати, получени от Aspergillus oryzae var и Aspergillus niger var, и тя може да се използва за определяне на активността на други протеази при рН 4,7 . Тестът се основава на 30-минутна ензимна хидролиза на хемоглобинов субстрат при рН 4,7 и 40 °. Нехидролизираният субстрат се утаява с трихлороцетна киселина и се отстранява чрез филтруване. Количеството на разтворения хемоглобин във филтрата се определя спектрофотометрично.


Реактиви и разтвори на киселинна протеаза
Хемоглобин Използвайте прах за субстрат на хемоглобин (Sigma Chemical Co., Каталожен номер H2625) или подобен висококачествен материал, който е напълно разтворим във вода.
Разтвор на ацетатен буфер Разтворете 136 g натриев ацетат (NaC2H3O2 · 3H2O) в достатъчно вода, за да се получат 500 mL. Смесете 25,0 ml от този разтвор с 50,0 ml 1 М оцетна киселина, разредете до 1000 ml с вода и разбъркайте. РН на този разтвор трябва да бъде 4,7 ± 0,02.
Разтвор на субстрата Прехвърлете 4,0 g от хемоглобина в 250-милилитрова чаша, добавете 100 ml вода и разбъркайте в продължение на 10 минути, за да се разтвори. Потопете електродите на рН-метър в разтвора и при непрекъснато разбъркване регулирайте рН до 1,7 чрез добавяне на 0,3 N солна киселина. След 10 минути регулирайте рН до 4.7 чрез добавяне на 0.5 М натриев ацетат. Разтворът се прехвърля в мерителна колба от 200 ml, разрежда се до обем с вода и се разбърква. Този разтвор е стабилен за около 5 дни, когато е в хладилник.
Разтвор на трихлороцетна киселина Разтворете 140 g трихлороцетна киселина в около 750 ml вода. Прехвърлете разтвора в мерителна колба от 1000 ml, разредете до обема с вода и разбъркайте добре.

Подготовка на пробата Разтваря се количество от пробата в ацетатния буферен разтвор, за да се получи разтвор, съдържащ във всеки mL между 9 и 22 HUT. (Такава концентрация ще доведе до отчитане на абсорбцията, в процедурата по-долу, в предпочитания диапазон от 0,2 до 0,5.)


Процедура на киселинна протеаза
Пипетирайте 10,0 ml от субстратния разтвор във всяка от поредица от 25- × 150 mm епруветки: по една за всеки ензимен тест и една за субстратната заготовка. Загрейте епруветките на водна баня при 40 ° за около 5 минути. Към всяка епруветка, с изключение на заготовката на субстрата, добавете 2,0 ml от пробата и започнете да определяте времето за реакцията в момента на добавяне на разтвора; добавете 2,0 ml от ацетатния буферен разтвор към празната епруветка на субстрата. Затворете епруветките с гумени запушалки № 4 и потупайте внимателно всяка тръба за 30 s по дланта на ръката, за да се смеси. Загрейте всяка епруветка на водна баня при 40 ° за точно 30 минути и след това бързо вкарайте 10,0 ml разтвор на трихлороцетна киселина във всяка епруветка. Разклатете енергично всяка тръба срещу запушалката за около 40 s и след това оставете да се охлади до стайна температура за 1 h, като през този период всяка тръба се разклаща срещу запушалката на интервали от 10 до 12 минути. Пригответе ензимни заготовки, както следва: Загрейте в отделни епруветки 10,0 ml от разтвора на субстрата и около 5 ml от препарата за проби на водна баня за 30 минути, след това добавете 10,0 ml от разтвора на трихлороцетна киселина към разтвора на субстрата, разклатете добре за 40 s и към тази смес се добавят 2,0 ml от предварително загрятата подготовка на пробата. Разклатете отново и охладете при стайна температура за 1 h, разклащайки на интервали от 10 до 12 минути.
В края на 1 h енергично се разклаща всяка епруветка и се филтрира през 11-сантиметрова Whatman No. 42 или еквивалентна филтърна хартия, префилтрирайки първата половина на филтрата през същата хартия. Определете абсорбцията на всеки филтрат в 1-сантиметрова клетка, при 275 nm, с подходящ спектрофотометър, като използвате филтрата от заготовката на субстрата, за да настроите инструмента на нула. Коригирайте всяко отчитане, като извадите съответното отчитане на ензима и запишете така получената стойност като AU.
[Забележка: Ако не се получи коригирано отчитане на абсорбцията между 0,2 и 0,5, повторете теста, като използвате повече или по-малко от ензимния препарат, ако е необходимо.]

Прехвърляне на 100,0 mg L-тирозин с хроматографско качество или еквивалент (Aldrich Chemical Co.), предварително изсушен до постоянно тегло, в мерителна колба от 1000 ml. Разтваря се в 60 ml 0,1 N солна киселина. Когато L-тирозенът се разтвори напълно, разтворът се разрежда до вода с вода и се разбърква добре. Този разтвор съдържа 100 µg тирозин в 1,0 ml. Пригответе още три разреждания от този изходен разтвор, за да съдържат 75,0, 50,0 и 25,0 µg тирозин на ml. Определете абсорбцията на четирите разтвора при 275 nm в 1-сантиметрова клетка на подходящ спектрофотометър спрямо 0,006 N солна киселина. Изгответе график на абсорбция спрямо концентрация на тирозин. Определете наклона на кривата по отношение на абсорбцията на µg тирозин. Умножете тази стойност по 1,10 и я запишете като AS. Трябва да се получи стойност от приблизително 0,0084.


Изчисляване на киселинната протеаза
Една HUT единица протеолитик (киселинна протеаза) активността се дефинира като това количество ензим, което произвежда за 1 min при определените условия хидролизат, чиято абсорбция при 275 nm е същата като тази на разтвор, съдържащ 1,10 µg / ml тирозин в 0,006 N солна киселина.
Изчислете HUT на g от първоначалния ензимен препарат по уравнението

HUT / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

в която 22 е крайният обем на разтвора за изпитване; 30 е времето за реакция, в min; и W е теглото, в g, на оригиналната взета проба.

[Забележка: Стойността за AS при внимателно контролирани и стандартизирани условия е 0,0084; тази стойност може да се използва за рутинна работа вместо стойността, получена от стандартната крива, но точната стойност, изчислена от стандартната крива, трябва да се използва за по-точни резултати и в случай на съмнение.]


СЕРТИФИКАТ ЗА АНАЛИЗ


Име на продукта Киселинна протеаза    
Друго име Неприложимо Страна на произход Китай
Щам Aspergillus oryzae Дата на производство 13 МАЙ 2019 г.
Партиден номер SP19050903 Срок на годност 12 МАЙ 2021
Пакет 25 кг / кофа Количество 100 кг
ПРОТОКОЛ СПЕЦИФИКАЦИИ РЕЗУЛТАТИ МЕТОД
ФИЗИЧЕН И ХИМИЧЕН АНАЛИЗ
Описание кафяв прах Спазва Визуално
Миризма и вкус Характерна миризма и вкус Спазва Вкус
Влага NMT 7% 5,1% Анализатор на влага
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
Дейност, която може да се идентифицира Положителен за активността на бромелаин Спазва В къщата
ДЕЙНОСТ
Протеазна активност NLT 500 000 HUT / g 508 270 HUT / g FCC VII
МИКРОБИОЛОГИЧНИ
Общ брой на бактериите
Колиформни бактерии (CFU / g)
Плесени и дрожди
E.Coli
Салмонела
Стафилококус ауреус
Pseudomonas aeruginosa
NMT 3 000 CFU / g
NMT 30 CFU / g
NMT 100 CFU / g
Отсъстващ
Отсъстващ
Отсъстващ
Отсъстващ
500 CFU / g
<10 CFU / g
<10 CFU / g
Не се открива
Не се открива
Не се открива
Не се открива
FDA BAM Онлайн Ch.3
FDA BAM Онлайн Ch.4
FDA BAM Онлайн Ch. 2
FDA BAM Онлайн Ch.4
FDA BAM Онлайн Ch.5
FDA BAM Онлайн Ch.12
AOAC
ТЕЖКИ МЕТАЛИ
Водя
живак
Кадмий
Арсен
NMT 3 ppm
NMT 0,1 ppm
NMT 1 ppm
NMT 1 ppm
0,21 ppm
± 0,1 ppm
<1 ppm
<1ppm
USP <231>
USP <231>
USP <231>
USP <231>
Съхранение: Съхранявайте на хладно и сухо място, защитено от светлина, дръжте барабана близо, когато не се използва.
Заключение: Съответства на стандартите за IU.
Срок на годност: Срокът на годност на киселинната протеаза при предписани условия на съхранение и херметична опаковка ще бъде 2 години.
Продуктът СЪОТВЕТСТВУВА с гореспоменатите спецификации
Одобрен от RICKY H. ZHU Упълномощен подписващ
*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of киселинна протеаза. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

Опаковане и съхранение

Опаковъчна торбичка за твърда храна, 25 кг / цев.


Киселинната протеаза трябва да се съхранява на сухо, хладно и добре проветриво място далеч от слънцето, топлината.

Плащане:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC и др.

Горещи маркери: Киселинна протеаза, Производители, Доставчици, Търговия на едро, Купуване, Фабрика, Персонализирани, На склад, Насипни, Безплатни мостри, Марки, Китай, Произведени в Китай, Евтини, Отстъпки, Ниска цена, Купете отстъпки, Цена, Ценова листа, Предложение, GMP, Качество, Последни продажби, Две години Срок на годност

Свързана категория

Изпратете запитване

Моля, прочетете формата си по-долу. Ще ви отговорим в рамките на 24 часа.